Guanidine Hydrochloride——โปรตีน refolding ละลายโปรตีน

- 2021-10-21-

        ในกระบวนการเปลี่ยนสภาพโปรตีน จะต้องละลายโปรตีนในร่างกายรวมก่อน การรวมตัวของโปรตีนในร่างกายหมายถึงการรวมตัวของโปรตีนที่แสดงออกโดยแบคทีเรียในเซลล์เพื่อสร้างอนุภาคของแข็งที่ไม่ใช้งานซึ่งเป็นอสัณฐานและไม่ละลายน้ำและละลายเฉพาะใน denaturants เช่นยูเรียและกวานิดีน ไฮโดรคลอไรด์.

หลังจากนั้น สารเปลี่ยนสภาพจะถูกกำจัดออกอย่างช้าๆ เพื่อคืนสภาพโปรตีนเป้าหมายจากสถานะยืดออกจนสุดที่แปลงสภาพเป็นโครงสร้างพับปกติ ในขณะที่ตัวรีดิวซ์จะถูกลบออกเพื่อให้เกิดพันธะไดซัลไฟด์ตามปกติ โดยทั่วไป กระบวนการปรับสภาพของกวานิดีน ไฮโดรคลอไรด์เริ่มต้นที่ 4M และสิ้นสุดที่ 1.5M มีหลายวิธี:

การเจือจางและการเติมซ้ำ: เติมน้ำหรือบัฟเฟอร์โดยตรงเพื่อเจือจางสารละลาย และทิ้งไว้ค้างคืนเพื่อให้โปรตีนตกตะกอน ข้อเสียคือปริมาณเพิ่มขึ้นอย่างมาก ความเร็วในการเจือจางของดีเนเจอร์นต์เร็วเกินไป และควบคุมได้ยาก การฟอกไตหรือการกรองด้วยอัลตราฟิลเตรชัน: สารดีเนเจอร์ทั้งสองชนิด สารโมเลกุลขนาดเล็กสามารถค่อยๆ แทรกซึมเมมเบรนที่มีรูพรุนได้ในระหว่างการฟอกไตหรืออัลตราฟิลเตรชัน ดังนั้นความเข้มข้นของดีเนเจอร์แรนต์ของสารละลายโปรตีนที่เสียสภาพจะค่อยๆ ลดลง และในที่สุดก็ถูกกำจัดออกไป เพื่อให้โปรตีนที่แปลงสภาพถูกพับและพับเก็บใหม่ ข้อดีคือไม่เพิ่มปริมาณ อัตราการกำจัดของเสียสภาพถูกควบคุมโดยค่อยๆ ลดความเข้มข้นของสารแทรกซึมภายนอก แต่กระบวนการนี้ช้าและใช้เวลานาน การเปลี่ยนสภาพในคอลัมน์: การเปลี่ยนสภาพทำได้สำเร็จในกระบวนการโครมาโตกราฟี ซึ่งได้รับการศึกษาและประสบความสำเร็จเมื่อเร็วๆ นี้ วิธีการพับกระดาษที่ใช้ในการผลิต ข้อดีคือความสามารถในการดูดซับของการตรึงด้วยโครมาโตกราฟีค่อนข้างต่ำเมื่อเทียบกับโปรตีนที่ทำให้เสียสภาพ ซึ่งสามารถปรับปรุงคุณภาพของการพับกลับและผลผลิตของกิจกรรม ในเวลาเดียวกัน มันสามารถแยกโปรตีนเป้าหมายและโปรตีนเจือปนเพื่อให้บรรลุวัตถุประสงค์ของการทำให้บริสุทธิ์ และสะดวกต่อการคืนสภาพ

โปรตีนเป็นโมเลกุลทางชีววิทยาที่เกี่ยวข้องกับชีวิต ซึ่งเป็นสารที่ขาดไม่ได้ในการรักษาความก้าวหน้าตามปกติของชีวิต และยังเป็นรหัสมรดกรุ่นที่สองของการสืบทอดชีวิตอีกด้วย งานวิจัยหลายชิ้นเกี่ยวกับโปรตีนเป็นหัวข้อที่น่าสนใจสำหรับผู้คนมากกว่า และการวิจัยเกี่ยวกับโครงสร้างของโปรตีนก็มีความสำคัญมากสำหรับความก้าวหน้าของยา การเปลี่ยนสภาพหรือการเปลี่ยนสภาพของโปรตีนเป็นหนึ่งในประเด็นหลักในการวิจัยด้านวิทยาศาสตร์เพื่อชีวิต ในหมู่พวกเขา denaturantกวานิดีน ไฮโดรคลอไรด์ไม่เพียงแต่ทำให้เสียสภาพโปรตีน อำนวยความสะดวกในการศึกษาโครงสร้างของมัน แต่ยังละลายโปรตีนในร่างกายรวมระหว่างกระบวนการเปลี่ยนสภาพ มีบทบาทสำคัญในการวิจัย